Joalo ka sesebelisoa sa boleng bo holimo, HPLC e ka lebisa mathateng a manyane habonolo haeba e sa sebetsoe ka tsela e nepahetseng nakong ea ts'ebeliso.E 'ngoe ea mathata a tloaelehileng haholo ke bothata ba ho hatella litšiea.Mokhoa oa ho rarolla chromatograph e fosahetseng kapele.Sistimi ea HPLC haholo-holo e na le botlolo ea polokelo, pompo, ente, kholumo, kamore ea mocheso oa kholomo, sebui le sistimi ea ts'ebetso ea data.Bakeng sa tsamaiso eohle, litšiea, lipompo le li-detectors ke likarolo tsa bohlokoa le libaka tse ka sehloohong tse atisang ho ba le mathata.
Senotlolo sa khatello ea likholomo ke sebaka se hlokang tlhokomelo e haufi ha u sebelisa HPLC.Ho tsitsisa ha khatello ea litšiea ho amana haufi-ufi le sebopeho sa tlhoro ea chromatographic, katleho ea kholomo, katleho ea karohano le nako ea ho boloka.Ho tsitsa ha khatello ea li-column ha ho bolele hore boleng ba khatello bo tsitsitse ka boleng bo tsitsitseng, empa ho e-na le hoo hore lebelo la ho fetoha ha khatello le pakeng tsa 345kPa kapa 50PSI (ho lumella hore ho sebelisoe khanya ea gradient ha khatello ea mokokotlo e tsitsitse 'me e fetoha butle-butle).Khatello e phahameng haholo kapa e tlase haholo ke bothata ba khatello ea likholomo.
E atileng haholo ho hloleha le tharollo ea HPLC
1, khatello e phahameng ke bothata bo atileng haholo ts'ebelisong ea HPLC.Sena se bolela ho phahama ka tšohanyetso ha khatello.Ka kakaretso, ho na le mabaka a latelang: (1) Ka kakaretso, sena se bakoa ke ho thibela mocha oa phallo.Tabeng ena, re lokela ho e hlahloba ka hloko.a.Pele, khaola sekeno sa pompo ea vacuum.Ka nako ena, tube ea PEEK e ne e tletse metsi e le hore tube ea PEEK e be nyenyane ho feta botlolo ea solvent ho bona hore na mokelikeli o ne o rotha ka thato.Haeba mokelikeli o sa rotha kapa o sa rotha butle, hlooho ea sehlapi se a koaleha.Kalafo: Kenya 30% ea nitric acid bakeng sa halofo ea hora 'me u hlatsoe ka metsi a mangata.Haeba mokelikeli o rotha ka mokhoa o sa reroang, hlooho ea sefe ea solvent e tloaelehile 'me e ntse e hlahlojoa;b.Bula valve ea Purge e le hore karolo ea selefouno e se ke ea feta har'a kholomo, 'me haeba khatello e sa fokotsehe haholo, hlooho e tšoeu ea filthara e koetsoe.Kalafo: Li-whiteheads tse hloekisitsoeng li ile tsa tlosoa 'me tsa sonicated le 10% isopropanol ka halofo ea hora.Ho nka hore khatello e theoha ka tlase ho 100PSI, hlooho e tšoeu e tlhotliloeng e tloaelehile 'me e ntse e hlahlojoa;c.Tlosa pheletso ea ho tsoa ha kholomo, haeba khatello e sa fokotsehe, kholomo e koetsoe.Kalafo: Haeba e le thibelo ea letsoai, hlatsoa 95% ho fihlela khatello e tloaelehile.Haeba tšitiso e bakoa ke lintho tse ling tse bolokiloeng haholo, phallo e matla ho feta mohato oa hona joale oa selefouno o lokela ho sebelisoa ho potlakela ho ea khatellong e tloaelehileng.Haeba khatello ea nako e telele ea ho hloekisa e sa fokotsehe ho ea ka mokhoa o ka holimo, ho kena le ho tsoa ha kholomo ho ka nkoa e le ho amana le sesebelisoa ho fapana le hoo, 'me mohala o ka hloekisoa ka mohato oa selefouno.Ka nako ena, haeba kholomo khatello e ntse e sa fokotsehe, kholomo monyako sieve poleiti ka feela nkeloa sebaka, empa hang ha tshebetso e se molemo, ho ke ke ho le bonolo ho lebisa phokotso ea kholumo e le hantle, kahoo leka ho sebelisa ka tlaase ho moo.Bakeng sa mathata a boima, ho ka nahanoa ho nkela kholomo sebaka.
(2) Boemo ba sekhahla sa phallo e fosahetseng: Sekhahla se nepahetseng sa phallo se ka tsosolosoa.
(3) Karo-karolelano e fosahetseng ea phallo: index ea viscosity ea likarolo tse fapaneng tsa phallo e fapane, 'me khatello ea tsamaiso e lumellanang ea phallo e nang le viscosity e phahameng le eona e kholoanyane.Haeba ho khoneha, li-solvents tse tlaase li ka nkeloa sebaka kapa tsa hlophisoa bocha le ho lokisoa.
(4) Khatello ea zero ea sisteme: fetola zero ea sensor ea boemo ba metsi.
2, khatello e tlase haholo (1) hangata e bakoa ke ho lutla ha sistimi.Seo u lokelang ho se etsa: Fumana khokahano ka 'ngoe, haholo-holo sebopeho se lipheletsong tse peli tsa kholomo, 'me u tiise sebaka se lutlang.Tlosa poso ebe u tiisa kapa u tsamaisa filimi ea PTFE ka matla a loketseng.
(2) Khase e kena ka pompong, empa hangata khatello ha e tsitsa ka nako ena, e phahameng le e tlaase.Habohlokoa le ho feta, pompo e ke ke ea khona ho monya mokelikeli.Mokhoa oa phekolo: bula valve ea ho hloekisa 'me u hloekise ka tekanyo ea phallo ea 3 ~ 5ml / min.Haeba ho se joalo, li-bubble tsa moea li ne li laeloa ho valve ea ho ntša metsi ho sebelisoa tube ea nale e inehetseng.
(3) Ha ho phallo e tsoang ho mobile phase: hlahloba hore na ho na le karolo ea selefouno ka botlolong ea polokelo, hore na sink e qoelisoa karolong ea selefouno, le hore na pompo e ntse e sebetsa.
(4) Sephahla sa litšupiso ha se koetsoe: valve ea referense e koetsoe ka mor'a ho fokotseha.Hangata e theohela ho 0.1.~ 0.2mL/ min ka mor'a ho koala valve ea litšupiso.
Kakaretso:
Leqepheng lena, ke mathata a tloaelehileng feela ho chromatography ea metsi a hlahlojoang.Ke ’nete hore tšebelisong ea rōna e sebetsang, re tla thulana le mathata a mang a eketsehileng.Ha re sebetsana le liphoso, re lokela ho latela melao-motheo e latelang: fetola feela ntlha e le 'ngoe ka nako ho fumana kamano pakeng tsa ntho e nahanang le bothata;Ka kakaretso, ha re fetola likarolo bakeng sa ho rarolla mathata, re lokela ho ela hloko ho khutlisetsa likarolo tse senyehileng sebakeng sa rona ho thibela litšila;Ho theha mokhoa o motle oa ho rekota ke senotlolo sa katleho ea ho sebetsana le liphoso.Qetellong, ha u sebelisa HPLC, ho bohlokoa ho ela hloko mohlala oa tlhahlobo ea pele le ts'ebetso e nepahetseng le tlhokomelo ea lisebelisoa.
Nako ea poso: Sep-18-2023